DWD-1紫外線検出器

DWD-1紫外線検出器（高性能2ビーム2波長）内蔵データ処理

波長範囲：254 nm、280 nm（同時検出）、その他254 nm、280 nm−400 nmスペクトル線の間で任意に2つの波長を同時に検出する。

*DWD-1機器の特徴

蛋白質280 nm/254 nm二波長測定：

タンパク質分子には、共役二重結合のチロシン、ロイシンなどの芳香族アミノ酸が含まれる。これらは紫外光を吸収する性質を持っており、その吸収ピークは280 nm波長であり、この波長内の吸収ピークの光密度値はその濃度に比例するため、蛋白質の定性、定量測定の根拠とすることができ、だからこそ、280 nmにおける紫外吸収法は通常クロマトグラフィーシステムにおける蛋白質濃度の連続的な監視に用いられる。しかし、各種蛋白質のチロシンとトリプトファンの含有量が異なるため、正確に定量するには、測定すべき蛋白質の純物を基準として比較する必要があり、あるいはその消衰係数を参考としてすでに知っている必要がある。また、多くの非蛋白質物質は280 nm波長でも-定吸収能力があり、干渉が発生する可能性がある。中でも特に核酸（プリンとピリミジン塩基）の影響が深刻である。280 nmでの吸収はタンパク質より10倍（グラム当たり）強いが、254 nmでの核酸の吸収はより強く、その吸収ピークは254 nm付近である。核酸254 nmにおける消衰係数は280 nmにおける2倍であり、

蛋白質は反対に、280 nm紫外吸収値は254 nmの吸収値より大きい。

通常：

純蛋白質の光吸収比：A 280/A 254”1.8

純核酸の光吸収比：A 280/A 254《0.5》

そのため、蛋白質溶液中に核酸が同時に存在する場合（生物系のほとんどがそうである）、OD 254 nmとOD 280 nmを同時に測定しなければならない。そして、2種類の波長の吸収度の比に基づいて、経験式によって補正し、核酸の影響を除去してタンパク質の真の含有量を推定した。

タンパク質濃度＝1.45×A 280－0.74×A 254（mg/ml）

この経験式は、異なる濃度比で知られているタンパク質（酵母エノラーゼ）と核酸（酵母核酸）の混合液の一連の測定データによって構築された。