一、上缶前の準備
アミン1、細胞懸濁液の調製アミン:予備培養した細胞をフラスコまたはシャーレから収集し、混合した後に1 mLを取って細胞計数を行い、接種密度が適切であることを確保する。
2、設備滅菌:反応器缶体、配管及び電極が滅菌(例えば121℃高圧蒸気処理)されているかどうかを検査し、微生物汚染を避ける。
鄒3、培地と緩衝液:十分な量の培地を用意し、目標範囲(例えば7.2-7.4)までpHを予備調整し、滅菌後冷却した。
二、接種と初期培養
1、無菌操作:生物安全キャビネットの中で、細胞懸濁液を無菌配管を通じて反応器内に移し、同時に圧縮空気を通して混合を補助する。
2、パラメータ設定:
鄒温度:哺乳動物細胞は通常37℃に設定される。
鄒溶存酸素(DO)鄒:初期は40%とし、ガス混合(O₂/N₂/CO₂)により安定性を維持する。
pH制御:蠕動ポンプを用いて酸/塩基を補充したり、COを注入したりして調整し、pHを6.5-7.0(細胞タイプに応じて調整)に維持する。
三、培養過程の監視
1、定期サンプリング:24時間ごとにオンラインサンプリングし、細胞密度、pH及び代謝物(例えばグルコース、乳酸)濃度を測定する。
鄒2、流加補料鄒:栄養消費状況に応じて、濃縮培地或いは特定成分(例えばアミノ酸)を流加し、細胞対数成長期を延長する。
鄒3、剪断力制御鄒:低回転速度攪拌(例えば50-100 rpm)或いは波状反応器を採用し、機械損傷を避ける。
四、収穫と洗浄
1、培養終了:細胞が衰亡期に入ったり、産物の蓄積がピークに達したりした場合、自動制御システムを停止する。
2、排液と収集:圧縮空気を通じて培養液を廃液タンクに排出し、細胞と上澄み液を分離する。
鄒3、滅菌の洗浄:精製水で缶体とコンポーネントを洗浄し、0.1 M水酸化ナトリウムを一晩浸漬し、残留鄒がないことを確保する。
五、注意事項
1、無菌操作:全過程で汚染を厳格に避け、操作前に手袋及び工具を消毒する必要がある。
2、パラメータ校正:定期的にpH、溶存酸素電極を検査し、データの正確性を確保する。
3、拡大生産:バッチ式操作は直接工業規模(例えば12000 L)に拡大することができるが、攪拌と物質移動効率を最適化する必要がある。
以上のステップにより、細胞培養バイオリアクターの操作を効率的に完了でき、モノクローナル抗体、ワクチンなどのバイオ製品の生産に適している。