2025年9月には、京都大学医学大学院皮膚科など複数の機関から北山 ナオミ研究チームは、『生化学 および 生物物理学 研究 コミュニケーション』誌に次のようなタイトルが掲載された「アトピック皮膚炎におけるPAR-2のターゲット化：新しい抑制剤E6795の臨床前評価」の研究。この研究はアトピー性皮膚炎（紀元）の病理的機序、新型プロテアーゼ活性化受容体に対する2（PAR-2型）小分子抑制剤E6795臨床前評価を行い、改善していることを探究した紀元関連炎症、かゆみ及び皮膚バリア機能障害などの作用。

要約

アトピー性皮膚炎（紀元）は慢性炎症性皮膚病であり、湿疹様皮膚損傷、激しいかゆみと皮膚バリア機能損傷を特徴とする。新型治療法は絶えず出現しているが、多くの患者は依然として疾病のコントロール不足、治療コストの高さ、病状の再発などの問題に直面している。プロテアーゼ活性化受容体2（PAR-2型)が紀元皮膚損傷における過剰発現は、炎症反応、かゆみ感の発生及び表皮の定常性アンバランスの促進に作用する。本研究では、E6795の臨床前研究証拠により、この化合物は上述の病理過程を標的として設計された小分子であるPAR-2型抑制剤キナーゼと薬理学的分析により、E6795せんたくせいよくせいPAR-2型、広範なキナーゼと薬理学的検出パネルにおいて極めて低い脱標的相互作用を示した。さらに、E6795両方のマウスモデルで改善された紀元炎症反応と免疫細胞浸潤の軽減を含む関連終点指標、経口投与により経皮水分流失が低減（TEWL の)、2%局所クリーム製剤はバリア機能に関連する組織学的発現及びかゆみ症状を改善した。組織学的検査により、E6795治療後に炎症細胞の浸潤が減少し、皮膚バリア機能が増強された。研究の結果、E6795選択的抑制によるPAR-2型シグナル伝達紀元病理生理学の3つの柱——バリア機能障害、炎症反応、かゆみ。本研究では、E6795コスト効果のある新しいタイプとして紀元局所治療薬の潜在力。

実験材料と機器

（一）実験材料

1. 実験動物：11-12周齢雄Nc/ナガマウス、6-14週齢雌バルブ/cマウス、6-10周齢雄C57BL/6J型マウス。

2. 試薬と抗体：MC903、E6795、PAR-2型アゴナルペプチドSLIGKV-NH8322ndle；和スリグル-NH₂、トリプシン、トロンビン、カルボキシメチルセルロース、ジメチルスルホキシド、ウラタ、各種蛍光標識抗体、フリパーカルシウム測定試薬、コラーゲンII型、DNase I は、10%ホルマリン、ソキシリン-伊紅染色試薬、トルイジンブルー染色試薬など。

3. 細胞と組織サンプル：ヒト胚腎HEK293細胞、健康な人の皮膚サンプル、紀元患者の皮膚損傷サンプル。

（二）実験機器

FDSS6000型蛍光検出システム、FACS フォーテッサフローサイトメータ、フロージョーソフトウェア、厚さ計、スクラッチ測定システム、384オリフィスポリプロピレン試薬貯液板、私は型コラーゲンパック透明ベースブラック384オリフィスプレート、通気ケージ、顕微鏡及び画像解析システム、ASCHきかそうさ経皮水分流失測定器

ASCH VAPOSCAN の経皮水分流失測定器

じっけんてじゅん

1. 細胞実験：HEK293細胞は3%子牛血清性DMEM の培地で培養し、384オリフィスプレート後荷重フリパーカルシウム測定試薬、異なる濃度を加えるE6795前処理30分後、トリプシンまたはトロンビンを加え、FDSS6000型システムモニタリング120秒以内のリアルタイム蛍光強度、4パラメータを採用物流モデル計算IC₅₀値を入力します。

2. 動物モデルの構築と投与：

￮MC903ゆうどう紀元モデル:バルブ/cマウス耳部連続8天部分塗布MC903、第4日から毎日内服E6795のカルボキシメチルセルロース懸濁液を用い、対照群に対応する溶媒を与えた。

￮Nc/ナガ深刻紀元モデル：皮膚炎のNc/ナガマウスは5グループ、毎日のローカル塗りE6795クリーム7日、生物学的対照として未処理群を設定した。

3. 薬効学的評価：

皮膚バリア機能：ASCHきかそうさ経皮水分流失測定器測定第0、3、7日の経表皮水分流失値（TEWL の）；マウス耳の厚さは、厚さ計を用いて毎日測定した。

ASCH VAPOSCAN の経皮水分流失測定器

（C）第3 天和第7 日の経表皮脱水量（TEWL の）検出結果。溶媒対照群と比較する、E6795経口投与は第7 日が明らかに下がるTEWL の。データは平均値±基準で誤表示（第8 天経口投与群n=3ほかのグループn=4）。* 補正後P < 0.05、溶媒対照群と比較（ダンネット検査）

￮かゆみ行動検出：第7天（てん）17:00翌日まで07:00、マウスを測定ケージに単独で入れ、2時間適応期間後、スクラッチ測定システムにより記録12時間以内の引っ掻き行動頻度。

￮組織学と免疫グループ化分析：実験終点マウス耳部皮膚組織を収集し、ホルムアルデヒド固定、パラフィン包埋後に作製した5μmスライス、実行H＆E染色（炎症細胞浸潤と表皮厚さの観察）、トルイジンブルー染色（肥大細胞を計数）及びPAR-2型免疫グループ化染色、ヒト皮膚サンプルも同様に行いますPAR-2型免疫グループ化検査。

￮フローサイトメトリー分析：マウス耳部皮膚組織を酵素分解して単細胞懸濁液を調製し、蛍光標識抗体で染色した後、FACS フォーテッサ好酸球、好中球、CD4⁺T細胞、好アルカリ球など免疫細胞サブグループの浸潤状況は、平方ミリ耳皮膚あたりの絶対細胞数で表される。

4. 薬物動態学の研究：マウス体内の検査E6795の血漿遊離分率、全血遊離分率及び血-スラリー比を用いて、その全身吸収と分布特性を評価した。

5. 選択性解析：キナーゼ選択性パネルとCEREP薬理学結合パネル、検査1μM和10μM濃度下E6795多種のキナーゼ、受容体、イオンチャネルの抑制作用に対して、その脱標的活性を評価した。

6. 統計解析：使用グラフパッドプリズム 7.03ソフトウェア、単一要素分散分析を採用（一方向 ANOVA）結合ダネット多重比較検査α=0.05検査水準のために、データは平均値で±標準エラー（平均±SEM)が表示されます。

実験的結論

1. E6795強力で選択的PAR-2型抑制活性、細胞カルシウムフラックス測定におけるIC₅₀値は6.56nMああ、そうだPAR-1抑制作用はなく、広範なキナーゼ及び薬理学的パネルにおいて脱標的活性は極めて低い。

2. 薬物動態表示E6795経口吸収性、血漿蛋白結合率は高いが97.5%しかし、少量の遊離薬で治療効果を発揮することができる。

3. 免疫グループ化の確認紀元患者の角質形成細胞にはPAR-2型表現は健康な人より上昇した。

4. にMC903ゆうどう紀元マウスモデルでは、E6795経口投与と局所投与はいずれも好酸球浸潤を減少でき、経口投与は低下できるTEWL の、皮膚バリア機能を改善し、局所投与は耳の厚さを軽減することができる。

5. にNc/Nga ADマウスモデルでは、2% E6795クリームは表皮の厚さ、肥大細胞の浸潤及び掻き取り行為を減少させ、皮膚炎関連組織学的表現を改善することができる。

6. E6795選択的抑制によるPAR-2型シグナル紀元病理生理学の三大コア（炎症、かゆみ、障壁機能障害）は、コスト効果が高く、低侵襲局所治療薬としての潜在力を有する。