同研究は北海道健康科学大学歯腔生物学科の新岡 武武新チームは『口腔生物学のアーカイブ』誌。ラット咬筋に焦点を当て、3つの問題を中心に展開する：（1）血管を支配する副交感神経が血管活性腸ペプチド（VIP）免疫反応性、（2）静脈内注射VIP血管拡張を誘発するかどうか、（3）アトロピンが存在するか存在しない場合、選択性VIP受容体拮抗薬[4Cl-D-フェ⁶,Leu¹⁷]VIP副交感神経血管拡張への影響。

要約

副交感神経血管拡張繊維はコリンエネルギーと非コリンエネルギーの2つのメカニズムによってラット咬筋の血管を支配することが知られているが、非コリンエネルギーのメカニズムはまだ明確ではない。近年、血管活性腸ペプチド（VIP）は口腔顎顔面（下顎下腺と下唇）の副交感神経血管拡張過程に関与することが確認されたが、ラット咬筋に関する研究は極めて限られている。本研究はラット咬筋を研究対象とし、評価を目的とする：（1）血管を支配する副交感神経がVIP免疫反応性、（2）静脈内注射VIP血管拡張を誘発するかどうか、（3）アトロピンが存在するか存在しない場合、選択性VIP受容体拮抗薬[4Cl-D-フェ⁶,Leu¹⁷]VIP副交感神経血管拡張への影響。研究によると、副交感耳神経節（原神（げんしん））および血管周囲の神経線維の両方が検出されたVIP免疫反応性静脈注射VIP血管拡張を誘発することができ、[4Cl-D-フェ⁶,Leu¹⁷]VIPエネルギー減衰VIP注射による血管拡張効果。単独で使用[4Cl-D-フェ⁶,Leu¹⁷]VIP副交感神経血管の拡張を抑制することはできないが、[4Cl-D-フェ⁶,Leu¹⁷]VIPアトロピンと併用すると、副交感神経血管拡張を弱めることができる。これらの結果は、（1）咬筋血管を支配する節後副交感神経に存在するVIP；（2）静脈内注射VIP咬筋血管拡張を誘発することができ、（3）ムスカリンコリン受容体がアトロピンによって遮断されたとき、またはアセチルコリン（ACh の）の放出が抑制する失活した場合、VIP咬筋の副交感神経血管拡張過程に関与する可能性がある。

実験材料と機器

（一）実験材料

1. 実験動物：成人オスウィスターラット

2. トレーサと試薬：2%蛍光金、無菌生理食塩水、VIP、選択性VIP受容体拮抗薬[4Cl-D-フェ⁶,Leu¹⁷]VIP、アトピン、ウラタン、パンクブロモアンモニウム、

3. 抗体と染色関連試薬：VIP抗体、嚢胞アセチルコリントランスポーター抗体、アレクサ-488ロバをマークしてウサギに抵抗するIgG抗体、アレクサ-568ロバを標識してヤギに抵抗するIgG抗体、フルオレセイン標識リシノール私は、1%非免疫ロバ血清、0.3%クランクプルスルーX-100、0.3%牛血清アルブミン、4%ポリホルムアルデヒド、0.1Mリン酸緩衝液、30%スクロース

（二）実験機器

4. オメガウェイブフロ-C1 レーザドップラー血流計、蛍光顕微鏡、共焦点レーザ走査顕微鏡、れいとうせんだんき、ハミルトンマイクロシリンジ、かねつパッド、人工呼吸器、カテーテル（大腿静脈及び大腿動脈挿管用）

オメガウェイブフロ-C1レーザドップラー血流計

じっけんてじゅん

1. 動物飼育と倫理審査

2. 蛍光二重標識実験

3. 免疫グループ化染色

4. 咬筋血流量測定：実験前に両側頸部迷走神経と頸部上交感幹を切断し、迷走神経と交感神経の影響を排除する。電気刺激による左側舌神経中枢切断端による咬筋副交感神経反射性血管拡張誘発、オメガウェイブフロ-C1 レーザドップラー血流計咬筋血流量のモニタリングと記録（MBF)が変化します。それぞれ異なる用量を静脈内注射するVIP、観察MBF変更;注射中100ng/kgのVIP前20分、継続注入[4Cl-D-フェ⁶,Leu¹⁷]VIP、そのペアを観察するVIP誘発MBF上昇の影響。また、それぞれアトロピン静注後、継続的に注入[4Cl-D-フェ⁶,Leu¹⁷]VIP時、及び両者を併用した場合、電気刺激舌神経、記録MBF変化、結果は投与前対照反応のパーセンテージで表した。

オメガウェイブフロ-C1レーザドップラー血流計

（A）舌神経（LN）電気刺激（対照）及び血管活性腸ペプチド静注（VIP、用量はそれぞれ1、10 和100 ng/kg）誘発平均血流量（MBF)の増加の典型的な例。

（B）注射の要約 0（生理食塩水のみ）、1、10 和100 ng/kg VIPアフタ誘発MBF増加状況（n=4）。データLN電気刺激誘発対照反応の割合を示す。

（C）（C）の選択性VIP受容体拮抗薬（[4 -えんそ- D -フェニルアラニン8310,ロイシン¹⁷]血管活性腸ペプチド、[4Cl-D-フェ⁶レウ¹⁷【VIP】）が存在しない場合、射出100 ng/kg VIP誘発MBF増加の典型的な例。

（D）（D）[4Cl-D-フェ⁶レウ¹⁷【VIP】対100 ng/kg VIP注射所によって誘発されるMBF増加した影響は、前処理反応の割合で表します（n=5）。

5. とうけいてきかいせき

実験的結論

1. ラット咬筋血管を支配する節後副交感神経に存在するVIP免疫反応性、そしてVIPとVAChT の耳神経節のFG標識ニューロン及び咬筋血管周囲の神経線維上に共定位が存在する、

2. 静脈注射VIP用量依存性方式でラット咬筋血管拡張を誘発し、かつ全身動脈血圧に影響せず、選択性VIP受容体拮抗薬[4Cl-D-フェ⁶,Leu¹⁷]VIP抑制可能VIP誘発されるこの血管拡張効果は、VIP咬筋血管壁上のVIP受容体が作用する、

3. 単独で使用[4Cl-D-フェ⁶,Leu¹⁷]VIP舌神経刺激による咬筋副交感神経血管拡張に影響はなく、アトロピン単独でこの血管拡張効果を部分的に弱めることができる、そして[4Cl-D-フェ⁶,Leu¹⁷]VIPアトロピンと併用場合、この血管拡張効果を抑制することができ、ムスカリン受容体がアトロピンによって遮断されたりアセチルコリン放出が抑制する場合、VIP咬筋の副交感神経血管拡張調節に関与する。