この研究は佐藤 Toshiyaチーム展開、そして『American Journal of Physiology - Regulatory, Integrative and Comparative Physiology（アメリカ生理学ジャーナル）』誌に掲載されている。

研究以ウラタン麻酔のラット（すなわちウレタンエチル）実験対象とするその舌神経（LN）中枢切断端に電気刺激を行い、同時にその顎下腺血流量（SMGBF）と舌下腺血流量（SLGBF）、ラット顎下腺と舌下腺の副交感神経血管拡張制御における差異を探究することを目的とする。

要約

本研究はレーザースポットイメージング血流計を用いて、ウラタン麻酔のラットにおいて、舌神経中枢切断端を電気刺激することにより、ラット顎下腺血流量（SMGBF）と舌下腺血流量（SLGBF)に変化します。結果により、舌神経刺激は顎下腺血流量と舌下腺血流量に強度依存性と周波数依存性の増加を引き起こし、顎下腺血流量の増加幅は舌下腺血流量より大きいことが明らかになった。自律神経コリンエネルギー神経節遮断剤である六甲アンモニウム静脈内投与（ヘキサメトニウム）、2種類の腺血流量の増加を顕著に抑制することができる。抗ムスカリン薬アトロピン（アトロピン）顎下腺血流量の増加を顕著に抑制でき、舌下腺血流量の増加に対して一部の抑制作用しかない。アトロピンを用いた場合、血管活性腸ペプチド（VIP）受容体拮抗薬はアトロピンが遮断できなかった部分の舌下腺血流量の増加を顕著に抑制することができ、一方、血管活性腸ペプチド受容体拮抗剤単独ではこの効果はなかった。舌神経刺激後、腺血流量が基礎レベルに回復するのに要する時間は、血管活性腸ペプチド注射後よりも短い。しかし、アトロピン注射後、舌神経刺激による腺血流量の回復時間は用量依存性が顕著に延長され、最終的には血管活性腸ペプチド注射後の回復時間と同レベルに達する。

本研究の結果は以下のことを表明した：1）舌神経刺激は副交感神経媒介の顎下腺血流量の増加（主にコリンエネルギー繊維による）と副交感神経媒介の舌下腺血流量の増加（コリンエネルギー繊維と非コリンエネルギー繊維による共同誘発）を引き起こすことができ、2）血管活性腸ペプチドエネルギー機構は非コリンエネルギー繊維媒介の舌下腺血流量の増加に参与し、ムスカリンエネルギー機構が失活した時に活性化される。

実験材料と機器

（一）実験材料

実験動物：11-16週齢、体重325-490グラムの雄ウィスターラット。

（二）実験きぐ

1. 血管挿管関連機器：大腿静脈及び大腿動脈挿管用機器。

2. 人工換気設備：呼吸器、気管挿管、赤外線分析器。

3. 血流モニタリング装置：オメガウェイブ OZ-1 はレーザスポット血流イメージャ（顎下腺と舌下腺の血流量を監視し、高解像度2次元血流画像を取得するために使用される）。

4. 神経刺激装置：双極銀電極、電気刺激器（舌神経中枢切断端に電気刺激を行う）、双眼顕微鏡（舌神経を分離する）。

5. 生理パラメータ監視機器：全身動脈血圧のモニタリング（SABP の）と心拍数（人事)を使用したデバイスです。

じっけんてじゅん

（一）動物準備

（二）レーザースポット血流イメージング

麻酔後のラットを水平位置に置き、顎下腺と舌下腺を黒いウレタンマットの上に置き、使用するオメガウェイブ OZ-1 はレーザスポット血流イメージャの780nm半導体レーザは拡散照明を行う。散乱光はろ過された後、首の上に位置する電荷結合素子（CCD）カメラ検出。移動赤血球の数と速度に関連する元のスペックル画像を記録し、コンピュータに転送して分析した。

オメガウェイブ OZ-1 はレーザスポット血流イメージャ

電気刺激左側舌神経（LN）中枢切断端対両側下顎下腺（SMG）と舌下腺（SLG）血流の影響

A：写真は両側下顎下腺（SMG）と舌下腺（SLG）を黒いウラタンマットの上に置き、刺激前（静止状態）、舌神経（LN）刺激開始後12 秒と20 秒における典型的なスペックル画像の時系列。

B：両側下顎下腺（SMG）と舌下腺（SLG）の血流（AU、任意の単位）、血管伝導性（VC）及び全身動脈血圧（SABP の）変化の典型的な例。

C：両側舌下腺（SLG、固体柱）と下顎下腺（SMG、中空柱）血管伝導性（VC）変化の平均値（±SE，標準エラー）（n=8、サンプル量は8）。分散分析を用いて行うトキー検査、血管伝導性の評価（VC）変化間差異の統計学的有意性。*P <0.01（差異は極めて顕著な統計学的意義がある）。

（三）舌神経電気刺激

両眼顕微鏡下で左側舌神経（LN）、切断後、ピボット切断端を電気刺激するために、電気刺激器に接続された双極銀電極を用いた。各ラットにおいて、異なる電圧、異なる周波数、2msパルス持続時間は舌神経に片側刺激を行い、毎回刺激が持続する20 秒、刺激間隔15分です。

（四）薬物作用検査

1. すべての薬物は無菌生理食塩水で溶解し、大腿静脈を通じて投与した。

2. 舌神経電気刺激による顎下腺血流量（SMGBF）と舌下腺血流量（SLGBF）自律神経系及びムスカリン受容体、血管活性腸ペプチド受容体によって媒介されるかどうかを増加し、それぞれ以下の操作を行う：

◦静脈注射10mg/kg臭化メチルアンモニウム、少なくとも投与中5 分（待機SMGBF、SLGBF和SABP の安定状態に達した）後、舌神経刺激による血流変化を測定し、同じ体積の生理食塩水を対照とした。

◦注射ポンプを用いて2ml/hの流速静脈注入0.1mg/ml硫酸アトロピンと0.2mg/ml血管活性腸ペプチド受容体アンタゴニスト、少なくとも注入開始10 分後、舌神経刺激による血流変化を検出した。

（五）舌下腺血流量増加の時間経過分析

左側舌神経中枢切断端用20V、20Hz、2msパルス持続電気刺激20 秒、または静脈内注射100ng/kg臭化アセチルコリン（ACh の）、10ng/kg血管活性腸ペプチド（VIP）、舌下腺血流量（SLGBF)が増加する。静脈内投与量（1-100μg/kg）の硫酸アトロピン（体積0.1ミリリットル）、同じ体積の生理食塩水を対照とする。

実験的結論

1. 舌神経（LN）刺激により顎下腺血流量（SMGBF）と舌下腺血流量（SLGBF）強度依存性と周波数依存性の増加を呈し、顎下腺血流量の増加幅は舌下腺血流量より大きく、同時に全身動脈血圧（SABP の）顕著に上昇し、心拍数（人事）顕著な変化がなく、かつ同側腺体血流量の増加は対側より顕著に大きく、この血流量の増加は血圧変化の受動的によるものではなく、“血管拡張”作用の結果。

2. 自律神経コリンを静脈内注射することにより神経節遮断剤である六甲アンモニウムは、顎下腺と舌下腺の血流量の増加を顕著に抑制することができ、舌神経刺激による2種類の腺体血流量の増加は主に副交感神経によって媒介されることを説明する。

3. 抗ムスカリン薬物アトロピンは顎下腺血流量の増加を顕著に抑制し、舌下腺血流量の増加を部分的に抑制し、かつ血管活性腸ペプチド（VIP）受容体拮抗剤は2種類の腺体血流量の増加に影響を与えないが、アトロピンを使用した場合、血管活性腸ペプチド受容体拮抗剤はアトロピンが遮断できなかった部分の舌下腺血流量の増加を顕著に抑制でき、顎下腺血流量の増加は主にコリンエネルギー線維によって誘発され、舌下腺血流量の増加はコリンエネルギー線維と非コリンエネルギー線維によって誘発され、かつ血管活性腸ペプチドエネルギー機構は非コリンエネルギー線維媒介の舌下腺血流量の増加に参与することを表明した。

4. 舌神経刺激後の腺血流量が基礎レベルに回復する時間は血管活性腸ペプチド注射後より短く、アトロピン注射後、舌神経刺激による腺血流量の回復時間は用量依存性が顕著に延長され、最終的には血管活性腸ペプチド注射後の回復時間と一致し、ムスカリンエネルギー機構が失活した時、血管活性腸ペプチドエネルギー機構が活性化され、舌下腺血流量が増加する機構はコリンエネルギーから血管活性腸ペプチドエネルギーに転換し、この転換はムスカリン受容体の活性化状態に依存することを説明した。

5. この研究結果はラット顎下腺副交感神経血管拡張に関する従来の報告と一致し（顎下腺副交感神経媒介の血流量増加は主にコリンエネルギー繊維による）、同時に舌下腺にコリンエネルギーと非コリンエネルギー繊維が共同媒介する血流量増加が存在し、またラット唾液腺副交感神経血管運動神経にはムスカリン自身受容体が存在する可能性があり、それは舌下腺において血管活性腸ペプチドの放出を負方向に調節することができ、顎下腺においてこの作用がなく、これは口腔顔面領域の血行動態調節に重要な意義を持つ可能性がある（アセチルコリン放出が抑制された場合）。