mRNA原液bufferとしての注射級HEPESバッファ系の作用原理解析

2016年にBioNTechが発表したLPX-mRNA製剤の記事でmRNA原液に採用されているbufferはHEPESである。本研究ではHEPES緩衝液を用いてRNA−LPXをさらに製造するために1 mg/mlのRNA原液を配置した。

HEPESはIVT反応系bufferとして優位性があり、これは私たちが関連文献を結合して、BioNTechがHEPES緩衝対をmRNA原液bufferとして採用した原因を推定した。

三、HEPESは他のバッファシステムに比べて突出した特徴

1、温度によるpKaの変化は非常に小さく、bufferのpH値は温度によるドリフトが小さい。

2、性質が安定しており、HEPESは他のイオンと相互作用しない、一方でHEPESは他のイオンと錯体化して他のイオン機能に影響しない、他方で他のイオンの存在はHEPESの緩衝能力に影響しない。

3、細胞培地におけるpHの維持は主に培地における重炭酸塩と5%のCO 2の共同維持に依存し、細胞が開放環境にある場合、CO 2の逸散はpHの急速な上昇を招いて生理pHの範囲から逸脱するが、HEPES緩衝対を添加した培地にはこの問題は存在しない。

4、HEPESは生物膜を通過しにくく、細胞内の生化学反応を妨害しない。

四、HEPESバッファシステムを使用する際の注意事項

1、paiアジン基の存在により、HEPESが光に暴露されると、H 2 O 2が生成され、これは培養された細胞または他の生物活性のある物体に毒性を産生するとともに、酸化還元に敏感な物質は共同で使用するのが適切ではないため、HEPESの緩衝液としての操作はできるだけ遮光条件下で行うべきである。

2、HEPESは生化学分野でよく見られる使用濃度は10-25 mMであり、濃度が10 mM未満の場合は緩衝能力が弱く、比較的に良い緩衝効果を発揮できず、濃度が高い場合はいくつかの細胞に毒害作用を持つ可能性がある。

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