Cy3 NHS エステルサイ3-N-ヒドロキシこはく酸イミドエステル

製品情報：

製品名	仕様	保存	価格（元）
Cy 3 NHSEster Cy 3−N−ヒドロキシコハクイミドエステル	10mg	−20℃遮光乾燥保存	2050.00

サプライヤー西安凱新生物科学技術有限公司

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製品の説明

Cyanine 3（Cy3），アントシアニンフルオレセイン染料ファミリーのメンバーの1人であり、化学合成されたポリメチレン染料である。現在、Cyanine系染料は非スルホン化アントシアニン（non−sulfonated cyanines）とスルホアントシアニン（sulfonatedcyanine）の2種類の異性体として供給されている。両者のスペクトル特性はほぼ一致しており、そのため、ほとんどの用途は互いに置換することができ、例えば、DNAやタンパク質などの生体分子を標識するために使用することができる。両者の主な違いは、スルホン化染料は水溶性であり、水相の標識反応系内で有機共溶媒を使用する必要がなく、また染料が水に凝集する可能性を下げ、標識効率を高めることである。

本Cyanine 3（Cy 3）はスルホン化染料の形で供給され、水に溶けやすく、Ex=555 nm，Em=565nm，明るい蛍光、光安定性が強く、pH非感受性などの利点があり、後続の蛍光イメージング及びその他の蛍光生物学的方法により目的のタンパク質を分析するために、標識ポリペプチド、タンパク質及び核酸などの生体分子に適している。

本Cy 3 NHSester、すなわちN−ヒドロキシコハク酸イミド（N−Hydroxysuccinimide）活性化基を含むCy 3は、生化学分子上のアミノ基（−NH₂）反応は安定なアミド結合を形成し、主に第1級アミンである。

製品の性質

英語の別名（英語の同義語）	シアニン3のモノスキニミジルエステル
分子量（分子量）	829.03
外観（外観）	パープルソリッド
Ex/Emについて	555nm/565nm
溶解性（溶解性）	DMSO、DMF、水に溶ける
構造式（構造）

輸送と保存方法

氷嚢輸送−20℃乾燥避光保存、有効期間1年。

注意事項

1）NHS ester基は湿度に非常に敏感であり、製品を乾燥保存しなければならない。使用前の製品は室温で少なくとも20 min戻しておく必要があります。

2）NHS ester基の加水分解は、水溶性緩衝系で競合反応に属する。タンパク質／ポリペプチド（濃度：1〜1 mg／ml）の第1級アミンに対する結合反応はpH 7〜9の範囲で行うことが推奨される。アミノ基を含まない緩衝系を用いて、pH 7-9。例えば、100 mMリン酸ナトリウム、150 mM塩化ナトリウム、pH 7.5、 100mM Hepes, pH 7.5。100 mM炭酸ナトリウム/炭酸水素ナトリウム、pH 8-9、または100 mMホウ酸緩衝液、pH 8-9。

3）Tris、グリシンなどの第1級アミン含有緩衝液を使用しないでください。

4）安全と健康のために、実験服を着て使い捨て手袋をはめて操作してください。

使用方法（Cy3-NHS エステル標識抗体）

【注意】：本方法を参考にしてポリペプチド、蛋白質またはその他の分子の標識を行うことができ、具体的な実験システムに基づいて適切な標識緩衝システム、サンプル濃度、染料濃度などのパラメータに対して適切な調整を行う必要がある。

1）抗体をアミノ基を含まない適切な緩衝液（eg.100 mMリン酸ナトリウム、150 mM NaCl、pH 7.5）で1〜5 mg／mlの濃度に溶解する。【注】：抗体中に残留Trisまたはglycine汚染がある場合、透析または脱塩して適切な緩衝液内に入れる必要がある。

2）使用前に、適量の脱イオン水または無水DMSOを用いてCy 3-NHSを溶解し、そのモル濃度が抗体モル濃度の400倍になるようにし、例えば、標識されるIgG濃度が1 mg/ml（eg 6.7μM）であれば、溶解後Cy 3-NHSの濃度は2.7 mMであり、標識されるIgG濃度が2.5 mg/mlであれば、溶解後Cy 3-NHSの濃度は6.75 mMである。

3）所望の標識効率を達成するために、抗体にCy 3−NHS試薬を適量添加する。【注】：Cy 3 NHSesterで抗体または他のタンパク質を標識する場合、輝度の高いカップリングの染料/タンパク質の比率は特定の用途に応じて4〜12である。高すぎる比率は非特異的背景を増加させ、抗体特異的結合を失い、凝集を引き起こす。適用に応じてマーカー比率を最適化することをお勧めします。

4）室温で60 min（またはそれ以上）インキュベートする、

5）適切な緩衝液透析または脱塩カラムを用いて未反応の試薬を除去する、

6）それぞれ280 nmと550 nmでCy 3−抗体の吸光値を検出する、

7）Cy 3標識効率（DOL）と標識濃度を測定する。式を参照してください。