液体クロマトグラフィーは、成分が複雑で、極性の差が大きいか、安定性が低い混合物を処理することができる。適切な固定相と流動相勾配を選択することにより、高沸点、高分子、熱不安定物質(例えば蛋白質、多糖類、農薬残留)の有効な分離を実現することができ、しかも高温加熱を必要とせず、物質分解の問題を回避することができる。高精度注入システムと高感度検出器(例えば紫外線検出器、蛍光検出器、質量スペクトル検出器など)を結合し、微量物質(濃度がμg/Lまたはng/Lレベルまで低い)の検出需要を満たすことができる。定性分析の面では、保持時間と特徴スペクトルまたは質量スペクトルの二重検証により、物質成分を正確に識別することができ、定量分析の面では、外標準法、内標準法などの成熟した方法を採用し、物質濃度の正確な計算を実現することができる。
液体クロマトグラフィーは液体を流動相とし、液体がクロマトグラフィーカラムを流れる際に受ける抵抗が大きいため、流動相がクロマトグラフィーカラムを迅速に通過できるようにキャリア液に高圧(一般に150〜35000 KPaまで)を印加する必要がある。同時に、カラム内の流動相の流速も古典液体クロマトグラフィーよりずっと速く(一般的には1〜10 mL/minに達することができる)、それによって分析時間を大幅に短縮した。高感度の検出器が広く採用され、分析の感度がさらに向上している。例えば、蛍光検出器の感度は10 gレベルに達することができ、しかもサンプル量が小さく、一般的には数マイクロリットルしか必要としない。
液体クロマトグラフィーは、ガスクロマトグラフィーに比べて試料の揮発性に制限されず、高沸点、熱安定性が悪く、相対分子量が大きい(400以上)有機物を分析することができる。これらの物質はほぼ全体の75〜80を占めており、原則として高効率液体クロマトグラフィーを用いて分離と分析を行うことができる。通常、自動サンプリングシステムとデータ処理ソフトウェアが搭載されているため、操作プロセスがより簡便で迅速になり、人工誤差のリスクが軽減されます。
液体クロマトグラフィーの測定手順:
1.サンプル前処理
−抽出:100 mlコーンフラスコに約10 g(正確には0.1 g)を秤量し、混合抽出液60 mlと塩化ナトリウム2 gを加え、30 min振動させた。濾過孔80〜120μmの濾過漏斗を通して吸引濾過し、残渣を3×10 ml混合抽出液で洗浄した。濾液と洗浄液を250 mlビーカーに合わせた。沸騰水中で30 min加熱し、取り外し、3000 r/minで20 min遠心分離し、4℃の冷蔵庫で20 min冷却した後、濾過孔が40〜80μmの濾過漏斗を通して吸引濾過し、濾液を収集した。
−浄化:サンプル成分が複雑であれば、固相抽出などの方法を用いてさらに浄化することができる。
−濃縮定容:抽出液を窒素ブロー計で近乾まで濃縮し、メタノールで適切な体積に定容し、0.22μm微孔ろ過膜を通過した後、測定する。
2.計器準備
−流動相の調製:HPLC級またはそれ以上の溶媒を選択し、比例に従って流動相を調製し、0.22μmろ過膜でろ過し、使用時に排気孔付きキャップを蓋する。
-カラム取り付け:カラム温度箱にカラムを正しく取り付け、配管を接続し、漏れがないようにします。
−システム平衡:ベースラインが安定するまで、システムを流動相で少なくとも30分間洗浄する。
3.サンプリング分析
−試料装填:気泡の発生を避けるために試料溶液を試料リングに注入する。
-データ収集:クロマトグラフィーワークステーションを起動し、データの収集を開始し、クロマトグラフィーを記録する。
4.データ処理
-定性定量:保持時間定性に基づいて、外標法または内標法を用いて定量する。
−結果報告:サンプル中の標的化合物の含有量を計算し、測定報告書を発行する。