共鳴ラマン分光計はその超高感度と選択性により、発色団、生体高分子及び微量物質を研究する装置となった。しかし、その精密な光学系は複雑なパラメータと結合しており、機器の使用中に信号が弱く、背景干渉、スペクトル歪みなどの問題が発生しやすい。共鳴ラマン分光計によく見られる「離調」現象への対応策を把握することは、実験の円滑な進行を確保する鍵である。

問題1:ラマン信号が弱いか検出できない
まずレーザーが正常にオンになっているかどうか、出力電力が基準に達しているかどうかを検査し、レーザー光路に遮蔽物がないことを確認する。サンプルが正確に焦点位置に置かれることを確保し、特に微量サンプルに対してXYZ三次元変位台を精密に調整する必要がある、顕微対物レンズの開口数(NA)が一致するかどうかを検査し、高いNA対物レンズは信号収集効率を著しく向上させることができる、分光計のスリットが開き、検出器(例えばCCD)の冷却が適切であるかどうかを確認し、温度が高すぎることによる暗雑音水没信号を避ける。
問題2:蛍光背景が強すぎて、ラマンピークを隠す
共鳴ラマンは目標信号を増強することができるが、試料自体の蛍光を励起することもできる。解決方法は:励起波長を交換して試料の強い吸収帯を避けることを試みること、時間ゲート制御または共焦点技術を用いて長寿命蛍光を抑制する、固体サンプルに対して、濃度を下げるために打錠または希釈を試みることができ、多項式フィッティングなどのベースライン補正アルゴリズムを使用して、後処理で背景を差し引きます。
問題3:スペクトルに「鬼ヶ峰」または波長較正ドリフトが現れる
「鬼ヶ峰」は光路汚染や乱視に由来することが多い。対物レンズ、フィルター及びサンプル表面のほこりを清掃する、レーザフィルタとトラップフィルタが老化したりずれたりしていないかどうかを検査する。標準サンプル(シリコンチップ520 cm??など)を使用ピーク)波長を定期的に校正し、ずれがひどい場合は、メーカーに連絡して光学系の再整列を行う必要がある。
問題4:レーザ出力が不安定であるか、または試料が局所的に過熱している
高出力レーザーはサンプルの分解や炭化を招きやすい。中性密度フィルタを用いて低有効レベルまで入射電力を調整すべきである、熱に敏感なサンプルは、高速スキャンを採用したり、積分時間を下げたりします。サンプルに良好な熱伝導性を確保するか、水冷サンプルテーブルを使用します。
問題5:ソフトウェアの制御不能またはデータ収集の中断
機器とコンピュータの接続線(USB/ネットワーク線)が緩んでいるかどうかを検査する、制御ソフトウェアとホストの再起動、ドライバが更新されていることを確認します。複数の高占有率プログラムを同時に実行しないようにします。頻繁に切断すると、ハードウェアインタフェースの障害が発生する可能性があります。