ヒトインターロイキン22（IL-22）ELISA検出キット技術説明書

BS-1649ヒトインターロイキン22（IL-22）ELISAキット

一、製品の概要

本キットは、ヒト血清、血漿または細胞培養上清液中のインターロイキン22（IL−22）の濃度を定量的に測定するために、二抗体サンドイッチ酵素結合免疫吸着法（ELISA）を用いた。IL-22は活性化されたT細胞、NK細胞などから分泌されるサイトカインであり、炎症反応、組織修復及び免疫調節に重要な役割を果たす。本キットは高感度、高特異性と再現性が良い特徴があり、科学研究実験と臨床検査に適している。

二、検査原理

被覆抗体鄒：抗ヒトIL-22モノクローナル抗体はミクロ多孔質プレートに事前被覆され、サンプル中のIL-22と結合して固相複合体を形成する。

ビオチン標識抗体鄒：ビオチン標識抗ヒトIL-22抗体を添加し、IL-22と結合してサンドイッチ構造を形成する。

酵素結合物8204：ワサビペルオキシダーゼ（HRP）標識ストレプトアビジンを添加し、ビオチンと特異的に結合する。

発色反応鄒：基質（TMB）を添加して発色し、色の濃淡はIL-22濃度に比例する。

終了と測定：終了液終了反応を加え、450 nm波長で吸光度（OD値）を測定し、標準曲線を通じてサンプル濃度を計算した。

三、キット組成

構成部品仕様数量

プリパック被微孔板96の孔/板1枚

標準品（フリーズドライ）2 ng/本2本

標準品希釈液10 mL 1本

ビオチン標識抗体6 mL 1本

HRPマークストレプトマイシン6 mL 1本

洗浄液（20×）50 mL 1本

発色液（TMB）11 mL 1本

終止液（2 M HタンパSOタンパ）6 mL 1本

四、サンプル要求

血清/血漿鄒：採取後室温で30分間静置し、遠心（2000×g、15分間）上清を採取し、−20℃或いは−80℃で保存し、繰り返し凍結融解を避ける。

細胞培養上清：遠心分離して細胞破片を除去し、直ちに検出または分注保存する。

注意事項：サンプル中にアジドナトリウム（NaN 8323）やEDTAなどの防腐剤を含まないようにして、検査結果に影響を与えないようにする。

五、操作手順

標準品希釈：標準品希釈液を用いて凍結乾燥標準品を2 ng/mLに再溶解し、倍比で希釈する（例えば2 ng/mL、1 ng/mL、0.5 ng/mL、0.25 ng/mL、0.125 ng/mL、0.0625 ng/mL）、0 ng/mL孔は空白対照である。

添加：穴ごとに100μL標準品またはサンプルを添加し、37℃で90分間インキュベートした。

洗浄：孔内の液体を捨て、洗浄液で板を3回洗い、毎回1分間浸漬する。

ビオチン標識抗体アミド：1ウェルに100μL、37℃で60分間インキュベートした。

酵素添加結合物のアミン：1ウェル当たり100μLを添加し、37℃で30分間インキュベートした。

発色と終止：穴ごとに90μL TMBを添加し、光を避けて15分間発色し、50μL終止液を添加する。

測定：450 nm波長でOD値を読み取り、標準曲線を描画し、サンプル濃度を計算する。

六、結果計算

標準品濃度を横軸、OD値を縦軸として、標準曲線を描画します。

サンプルOD値に基づいて標準曲線上の濃度に対応し、希釈倍数を乗算する（サンプルが希釈されていない場合は1を乗算する）。

ELISA Calcなどの専門ソフトウェアを使用して曲線フィッティングと濃度計算を行うことをお勧めします。

七、性能指標

感度鄒：検出限界は0.015 ng/mLである。

精密度：バッチ内変異係数（CV）<10%、バッチ間CV<15%。

線形範囲：0.0625-2 ng/mL、相関係数（R²）>0.99。

回収率：高、中、低濃度サンプルに対してスケーリング回収を行い、回収率は85%-115%の間である。

特異性：IL-10、IL-17、IL-23などのサイトカインと交差反応しない。

八、注意事項

試薬保存‌：未開封試薬キット2-8℃保存、有効期間12ヶ月、開封後の標準品、ビオチン標識抗体、HRP標識物は分装凍結保存し、繰り返し凍結融解を避ける必要がある。

操作規範：液移動時に気泡の発生を避け、洗浄時に孔内の液体の廃棄を確保する。

安全防護：終止液は強酸を含み、操作時に手袋とゴーグルを着用する。

品質管理：ロット毎の実験は二重穴再検査を設置し、OD値が異常な場合は繰り返し検査する必要がある。

九、よくある問題分析

問題現象の原因となる可能性のあるソリューション

標準曲線線形差標準品の希釈ミスは標準品を再調製し、倍比希釈を確保する

サンプルOD値が高すぎるサンプル濃度が検査範囲を超えて希釈サンプルを再検査した

発色が浅すぎたり、発色しなかったりする酵素結合物失活検査試薬の有効期間、新しい試薬を交換する

洗浄後の孔内に残留液体がある洗浄回数が不足しているか、力が足りないので洗浄回数を増やし、力を入れて孔板をたたく

注：以上は参考に供するだけで、本試薬は科学研究用に供するだけで、実際のデータとしてではなく、実験は厳格に説明に従ったり、技術教師に相談したりしなければならない。

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