ヒトインターロイキン17（IL-17）ELISA検出キット技術説明書

BS-9770ヒトインターロイキン17（IL-17）ELISAキット

一、製品の概要

本キットは二抗体サンドイッチ酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）を採用し、ヒト血清、血漿及び関連生物液体サンプル中のインターロイキン17（IL-17）の含有量を定量的に測定することに専用する。IL-17はTh 17細胞から分泌される炎症促進サイトカインであり、自己免疫疾患と炎症反応に重要な役割を果たす。

二、検査原理

二抗体サンドイッチ技術：

プリパックは、ヒトIL−17単抵抗性の微多孔質プレートによってサンプル中のIL−17を捕捉した。

ワサビペルオキシダーゼ（HRP）標識の二次抗体を添加し、「抗体−抗原−酵素標識抗体」複合体を形成した。

TMB発色反応により、色の濃淡はIL-17濃度と正の相関を示し、450 nm波長で吸光度（OD値）を測定した。

三、キット組成

成分仕様（96穴構成）保存条件

酵素標準被覆プレート1×96ウェル2-8℃

標準品（270 ng/L）0.5 ml×1本2–8℃（長期-20℃）

標準品希釈液1.5 ml×1本2–8℃

酵素標準試薬6 ml×1本2-8℃

試料希釈液6 ml×1本2–8℃

発色剤A/B液各6 ml×1本2–8℃遮光

終止液6 ml×1本2–8℃

濃縮洗浄液20 ml×30倍×1本2–8℃

説明書1部室温

四、サンプル処理要求

血清/血漿：

室温10-20分静置、2000-3000回転/分離心20分、上澄み液を採取

繰り返しの凍結融解を避け、沈殿が発生した場合は再び遠心分離する必要がある

細胞培養上清：

遠心分離後に上清を採取し、分泌性成分を測定する際に無菌操作が必要である

尿/組織均質：

尿液は遠心分離した後に清を取る、組織サンプルは均質にして遠心分離しなければならない

五、操作手順

標準品希釈：

勾配希釈標準品（例えば270 ng/Lから1 ng/L）、1穴あたり50μL添加

サンプルのサンプリング：

サンプルを希釈した後、10μLを微孔に添加し、添加量40μL（総希釈度5倍）

温育：

37℃で30分間遮光反応、封板膜被覆

洗濯：

洗浄液を1分間/回浸漬し、3〜5回繰り返し、穴の中の液体をたたく。

発色と終了：

TMB発色液を加えて遮光反応を15〜20分行い、液終止反応を終了した。

読み取り：

酵素スケール450 nm波長によりOD値を測定し、標準曲線により濃度を計算した。

六、性能指標

感度：0.1 pg/mL（マウスIL-17参考値）まで低く、ヒトIL-17は約3.8 pg/mLであった。

測定範囲：7.8-500 pg/mL（ヒトIL-17 C参考値）、または31.3-2000 pg/mL（ヒトIL-17）。

特異性：IL-17ファミリーの他のメンバー（IL-17 B、IL-17 Fなど）と交差反応がない。

再現性：板内/板間変異係数<10%

七、注意事項

保存条件：

キット2-8℃保存、標準品長期保存には-20℃必要

有効期間：

6ヶ月（4℃）、12ヶ月（-20℃）。

実験環境：

強い光の照射を避け、発色液は37℃で予備平衡する必要がある。

八、参考文献

二抗体サンドイッチ法の原理及び操作規範

サンプル処理と保存ガイド

キット性能検証データ

注：以上は参考に供するだけで、実際のデータとしてではなく、実験は厳格に説明に従ったり、技術教師に相談したりしなければならない。

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