ヒトγインターフェロン（IFN−γ）ELISA検出キット技術説明書

BS-0033ヒトγインターフェロン（IFN-γ）ELISAキット

一、検出原理

本キットは二抗体サンドイッチ法による酵素結合免疫吸着試験（ELISA）を用いた。抗ヒトIFN−γモノクローナル抗体を微多孔板にプリパックし、サンプル、標準品及びビオチン標識の検出抗体を順次加え、抗体−抗原−酵素標識抗体複合体を形成した。洗浄後、ワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン（Streptavidin−HRP）を加えて結合し、TMB基質により発色させた。色の濃淡はサンプル中のIFN−γ濃度と正の相関を示し、酵素スケールを用いて吸光度（OD値）を測定して定量分析を行った。

二、キット組成

成分96穴構成48穴構成保存条件

プリパック被微孔板12孔×8条12孔×4条2-8℃

凍結乾燥標準品1管1管2-8℃（再溶解後-20℃）

ビオチン標識抗体100μL 100μL 2-8℃（避光）

ストレプトマイシン−HRP 100μL 100μL 2−8℃（遮光）

サンプル希釈液30 mL 15 mL 2-8℃

20×洗浄緩衝液20 mL 10 mL 2-8℃

TMB基質液10 mL 5 mL 2-8℃遮光

終止液10 mL 5 mL 2-8℃

封板膜4枚2枚の室温

三、サンプル要求

1.サンプルタイプ

血清/血漿鄒：EDTAまたはヘパリンを用いて抗凝固し、溶血を避ける。

細胞培養上清：遠心分離により粒子状物質を除去し、繰り返し凍結融解を避ける。

その他の生体液8204：脳脊髄液、胸腹水のように、澄ましてから検査する必要がある。

2.サンプル処理

希釈比率：血清/血漿は1：5希釈（サンプル：希釈液＝1：4）を提案し、細胞上清は1：2希釈を提案する。

保存条件：短期（≦7日間）2-8℃で保存し、長期的には-80℃で分注凍結保存する必要がある（繰り返し凍結融解を避ける）。

四、実験手順

1.試薬準備

洗浄液：蒸留水で20×濃縮液を1×作動液（例えば20 mL濃縮液＋380 mL水）に希釈する。

標準品の再溶解：凍結乾燥標準品に1 mL標準品の希釈液を加え、15分間静置し、高濃度母液に配合する。

勾配希釈：7本のEP管をとり、各管に500μL希釈液を加え、母液から500μLを移して混合し、順次倍比希釈する（例：1000→500→250→125→62.5→31.25→15.625 pg/mL）。

2.添加と温育

1ウェル当たり100μLの標準品または希釈後のサンプルを添加する（複孔検査を推奨する）。

37℃で光を避けて90分間インキュベートし、封止フィルムを密封した。

3.洗濯

穴の中の液体を振り切って、1×洗浄液で3回洗浄して、毎回1分浸して、たたいて乾かします。

4.発色と終了

1ウェル当たり100μLのビオチン標識抗体（事前に抗体希釈液で1：100希釈）を添加し、37℃で60分間光を避けてインキュベートした。

洗浄後、1ウェル当たり100μLストレプトアビジン−HRP（事前にABC希釈液で1：100希釈）を添加し、37℃で30分間光を避けてインキュベートした。

洗浄後、各ウェルに100μLのTMB基質液を添加し、37℃で光を避けて15〜20分間発色させた。

1ウェル当たり50μL終止液終止反応を添加した（溶液は青から黄色に変化した）。

5.測定

450 nm波長OD値（基準波長570〜630 nm）を酵素スケールで30分間測定した。

五、結果計算

標準品濃度を横座標とし、OD値を縦座標として標準曲線を描画する（4パラメータフィッティング）。

サンプルOD値に基づいて、回帰方程式によって実際の濃度を計算し、サンプルの希釈に希釈倍数を乗じる必要がある場合。

六、性能指標

パラメータ指標

感度≤1.0 pg/mL

測定範囲15.63-1000 pg/mL

精度板内CV<10%

回収率83～113%

特異性とヒトIL−2、IL−4などとの交差反応はない

七、注意事項

試薬保存鄒：使用していないスラットは2-8℃に密封保存し、湿気を避ける必要がある、TMB基質液は光を避ける必要がある。

サンプル処理：溶血、高脂血サンプルの使用を避ける、高濃度サンプルは、希釈倍数を事前実験的に決定する必要がある。

操作規範鄒：

サンプリング時に気泡を避け、銃頭を交換する必要がある。

温育時間は規定の範囲内に厳格に制御され、蒸発を防止する。

品質管理：ロット毎の実験に空白穴（S 0）及び陰性対照を設置する必要がある。

安全上の注意事項：液の酸含有を中止し、手袋を着用して操作する必要がある、廃棄物は生物危害によって処理する。

八、有効期間

キットの2〜8℃での有効期間は6ヶ月であり、開封後の標準品は-20℃で分注凍結保存することを提案した。

注：以上は参考に供するだけで、本製品は科学研究に供するだけで、実際のデータとしてではなく、実験は厳格に説明に従ったり、技術教師に相談したりしなければならない。

ヒトインターロイキン1（IL-1）ELISAキット実験使用説明書学生は品質管理を企業の生命と見なし、企業競争力の向上を追求してきた。会社は経営の中で一貫して承諾している：規律を守り、法を守り、自分を厳しく律し、寛仁は待ち、勇敢に引き受ける企業精神を標準とし、硬すぎる品質と優れたサービスで市場を維持し、開拓し、顧客の需要を最大限に満たす。お客様とのウィンウィンは、私たちの発展目標です。ネイティブ！信頼できるパートナー。私たちはあなたと誠実に協力して、美しい未来を作りたいと思っています。ブンゼンキット