ヒトグルタチオンペルオキシダーゼ4（GPX 4）ELISA検査キット技術説明書

BS-9843ヒトグルタチオンペルオキシダーゼ4（GPX 4）ELISAキット

製品概要

本キットは、ヒト血清、血漿、組織ホモジナイズ、細胞分解液及び細胞培養上清などのサンプル中のグルタチオンペルオキシダーゼ4（GPX 4）濃度を体外定量的に測定するために、二抗体一段階サンドイッチ酵素結合免疫吸着法（ELISA）820を用いた。GPX 4はグルタチオンペルオキシダーゼ家族の重要なメンバーであり、触媒還元型グルタチオン（GSH）を通じて脂質過酸化物を除去し、鉄死の抑制、細胞膜の完全性の維持及び抗酸化ストレスの中で核心作用を発揮する。

けんしゅつげんり

二抗体サンドイッチ法：包被抗体とサンプル中のGPX 4を結合し、ビオチン標識抗体は複合体を形成し、ワサビペルオキシダーゼ（HRP）標識のストレプトアビジンは発色反応を触媒し、発色強度はサンプル中のGPX 4濃度に比例する。

特異性：GPX 4を特異的に識別でき、類似物と交差反応がなく、検査の正確性を確保する。

キット組成

コンポーネント仕様/説明

抗ヒトGPX 4抗体を含む予備被覆されたミクロ多孔質プレート96の多孔質プレート

標準品凍結乾燥粉末、組換えヒトGPX 4蛋白、使用前に希釈液で再溶解

ビオチン標識抗体液体、HRP標識抗ヒトGPX 4抗体

発色性基質（TMB）液体，3，3′，5，5′−テトラメチルビフェニルアミン溶液

終止液2 M硫酸溶液

洗浄緩衝液20×濃縮液、吐温-20を含む

高濃度試料を希釈するための試料希釈液緩衝液

封板膜は透明であり、微孔板密封用である

サンプルの処理と保存

サンプルタイプ：血清、血漿、組織均質、細胞分解液、細胞培養上清など。

処理方法：

血清/血漿：室温で凝固後遠心分離（3000 rpm、10分）し、上清を採取した。

組織均質：生理食塩水を用いて10%均質スラリーを調製し、遠心分離して上澄みを取る。

細胞分解液：分解後遠心分離（15000 rpm、10分）し、上清を採取した。

保存条件：短期（≦7日）2-8℃で保存し、長期（>7日）は分装-20℃で凍結保存し、繰り返し凍結融解を避ける。

操作手順

標準品希釈鄒：標準品をサンプル希釈液で順次1000に希釈するpg/mL、500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.63 pg/mL，0 pg/mL空白対照のために。

添加：穴ごとに100μL標準品またはサンプルを添加し、37℃で90分間インキュベートした。

洗浄‌：孔内の液体を捨て、孔ごとに洗浄液を満タンにし、30秒静置した後に捨て、5回繰り返し、拍乾した。

ビオチン標識抗体アミド：1ウェル当たり100μLのビオチン標識抗体を添加し、37℃で60分間インキュベートした。

発色性基質を添加：1ウェル当たり90μLのTMB基質を添加し、37℃で15〜30分間光を避けてインキュベートした。

停止反応鄒：穴ごとに50μLの停止液を添加し、混合後すぐに吸光度を測定した。

結果の計算

機器設定：酵素スケール波長450 nm（基準波長630 nm）。

データ処理：標準品濃度（pg/mL）を横軸とし、OD値を縦軸とし、標準曲線を描画する。サンプル濃度は曲線方程式により計算し、希釈倍数を乗算する。

感度：7.69 pg/mL、測定範囲15.62-1000 pg/mL。

注意事項

交差反応：GPX 1、GPX 2、GPX 3などの類似物と交差反応を起こさない。

操作規範鄒：

洗浄はきれいにし、残留液体が結果に影響を与えないようにしなければならない。

発色時間は15〜30分に制御し、過度の発色によるデータのばらつきを避ける。

サンプルは繰り返し凍結融解を避け、蛋白分解を防ぐ。

品質管理：ロット毎の実験に二重穴再測定を設置することを提案し、CV値<10%は合格である。

ちょぞうじょうけん

未開封キット：2-8℃遮光保存、有効期間6ヶ月。

開封後：標準品、抗体、基質などの成分は説明書の要求に従って分装保存し、繰り返し凍結融解を避ける。

本明細書は科学研究用途にのみ使用され、臨床診断には適用されない。操作前に完全な説明書をよく読んで、実験室の安全規範を守ってください。

注：科学研究に供するため、以上の資料は参考に供する。

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