ラットグルタチオン還元酵素（GSR）ELISAキット試験説明書

BS-3507ラットグルタチオン還元酵素（GSR）ELISAキット

一、実験原理

本キットは二抗体サンドイッチ酵素結合免疫吸着法（ELISA）を用いてラットグルタチオン還元酵素（GSR）活性を測定した。抗ラットGSR抗体をマイクロウェルプレートにカプセル化し、測定対象サンプルを添加した後、サンプル中のGSRはカプセル化抗体と結合した。その後、ビオチン標識検出抗体を加え、「抗体−抗原−酵素標識抗体」複合体を形成した。ワサビペルオキシダーゼ（HRP）標識ストレプトアビジン（SABC）を添加後、TMB基質の発色により、450 nm波長で吸光度（OD値）を測定し、OD値はサンプル中のGSR濃度と正の相関を示した。

二、キット組成

成分48穴構成96穴構成保存条件

プリパック被酵素スケールプレート8×6本8×12本2−8℃

標準品（凍結乾燥）1本1本2-8℃

標準品/サンプル希釈液10 mL 15 mL 2-8℃

ビオチン化検出抗体60μL（100×）120μL（100×）−20℃

ビオチン化抗体希釈液6 mL 12 mL 2−8℃

SABC複合体6 mL 12 mL 2-8℃

TMB発色液（A/B）各3 mL各6 mL遮光2-8℃

終止液6 mL 12 mL 2-8℃

20×濃縮洗浄液30 mL 60 mL室温

封板膜2枚4枚の室温

明細書1部1部-

三、サンプル処理

血清/血漿サンプル：

全血室温で2時間または4℃で一晩静置し、1000 gを20分間遠心分離し、上清を採取した。

溶血または高脂血サンプルを避け、2〜8℃で48時間保存することができる、長期保存には-20℃または-80℃が必要で、繰り返し凍結融解を避ける。

組織/細胞サンプル：

組織ホモジナイズまたは細胞分解後、遠心分離して清を採取し、タンパク質濃度を推奨範囲に調整した。

四、実験手順

洗浄液調製：

20×濃縮洗浄液を蒸留水で20倍希釈する（例えば1 mL濃縮液＋19 mL蒸留水）。

標準品希釈鄒：

7本の遠心管を取り、1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、空白（Blank）を表示する。

各管に200μL標準品/サンプル希釈液を添加し、最初の管に200μL標準品原液を添加し、混合した後、段階的に希釈した。

添加とインキュベーション：

1ウェル当たり100μLの標準品またはサンプルを添加し、37℃で90分間インキュベートした。

液体を捨て、3回洗浄する（1回に1〜2分間浸漬する）。

酵素標準抗体反応アミン：

1ウェル当たり100μLのビオチン化検出抗体（1：100で希釈）を添加し、37℃で60分間インキュベートした。

3回洗濯する。

SABC複合体反応鄒：

1ウェル当たり100μLのSABC複合体を添加し、37℃で30分間インキュベートした。

3回洗濯する。

発色と終了

各ウェルに90μLのTMB発色液（A/B液を等量混合）を添加し、光を避け37℃で15分間インキュベートした。

1ウェル当たり50μLの終止液を加え、混和した直後に測定した。

五、結果計算

標準品濃度を横座標（X）、OD値を縦座標（Y）とし、標準曲線を描画する。

サンプルOD値に基づいて標準曲線方程式を代入し、GSR濃度を計算する。

六、注意事項

試薬保存‌：

標準品、ビオチン化抗体は-20℃で保存し、繰り返し凍結融解を避ける必要がある、その他の成分は2〜8℃で保存した。

サンプル処理

溶血、高脂血または濁りサンプルの使用を避ける、組織サンプルは十分に均質である必要がある。

操作規範鄒：

液体を移すには正確で、交差汚染を避ける必要がある。洗浄に必要であり、残留液体が結果に影響する。

計器校正‌：

酵素スケールの波長は450 nmに較正し、空孔をゼロに調整する必要がある。

セキュリティ保護：

終止液は硫酸を含み、操作時に手袋とゴーグルを着用する。

七、予想結果

感度：0.156 ng/mLまで低いGSRを検出できる。

線形範囲：0.156-10 ng/mL。

八、応用範囲

本キットはラット血清、血漿、組織均質及び細胞培養上清液中のGSRの定量検査、科学研究用途に適している。

ヒント：具体的な操作は実際のキットの説明書を基準にしてください。実験前に完全な説明を読んで、成分の完全性を確認しなければなりません。

注：以上は参考に供するだけで、本試薬は科学研究用に供するだけで、実際のデータとしてではなく、実験は厳格に説明に従ったり、技術教師に相談したりしなければならない。